Идентификация микроорганизма в гемокультуре

[Anton Verbine]

Есть ли у кого-нибудь под рукой алгоритмы, по которым осуществляется дальнейшая идентификация после получения роста (гемокультура)на не-селективной среде. Как отличают, кто- дрожжевой грибок- и посеется на Сабуро, кто- бактерия, или скажем, актиномицет, и как подбирают среды в дальнейшем.
Были ли у кого-нибудь случаи, что высеявшийся организм сочли за дрожжи, и он рос себе на Сабуро, и даже как-то идентифицировался по АПИ, а потом из-за каких-то неувязок к нему присмотрелись поподробнее, и- он оказался бактерией?

[Tusia]

"Настольная книга" российского бактериолога - 535-й приказ, а именно МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ УНИФИЦИРОВАННЫХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ (БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ) МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
В КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРИЯХ, 1985 года.

Что касается "дальнейшей идентификации после получения роста (гемокультура)на не-селективной среде", то алгоритмы выбора сред там не расписаны. Цитирую:
При появлении видимого роста делают мазки, окрашивают их по Граму, и, в соответствии с данными бактериоскопии, делают высевы на среды для определения чувствительности к антибактериальным препаратам и проводят идентификацию выделенных бактерий. При подозрении на анаэробную флору делают параллельные высевы для культивирования в аэробных и анаэробных условиях.
В разных лабораториях могут быть разные "наработки" (многое зависит от материальной обеспеченности лаборатории), но микроскопия имеет первостепенное значение.

Были ли у кого-нибудь случаи, что высеявшийся организм сочли за дрожжи, и он рос себе на Сабуро, и даже как-то идентифицировался по АПИ, а потом из-за каких-то неувязок к нему присмотрелись поподробнее, и- он оказался бактерией?

А как же! Только наоборот (даже признаваться стыдно): у меня несколько раз Candida albicans, выросшая на Эндо, "идентифицировалась" как бактерия. (Это в начале работы, когда я еще микроскопию недооценивала )

Как отличают, кто- дрожжевой грибок- и посеется на Сабуро, кто- бактерия

535-й приказ для выявления возбудителя грибкового сепсиса рекомендует засевать кровь в том числе и на жидкую среду Сабуро.

[Anton Verbine]

Сообщение от Tusia

...(Это в начале работы, когда я еще микроскопию недооценивала )

....

...а насколько точна в таком аспекте микроскопия?. Насколько я понимаю, клетки дрожжей могут варьировать по размеру от 1 до 10 микрон... И форма- тоже разная...

[AlexT]

В принципе сейчас можно доказать наличие именно кандид определением антигена кандид или ПЦР на ккандиды как в исслледуемой культуре, так и непосредственно в крови

[Anton Verbine]

Сообщение от AlexT

В принципе сейчас можно доказать наличие именно кандид определением антигена кандид или ПЦР на ккандиды как в исслледуемой культуре, так и непосредственно в крови

...я в данном случае и обкатываю ПЦР диагностику у определённой подгруппы больных с сепсисом, только не кандиды, а вообше всех дрожжей, с "пан-грибковым" праймером и последующим секвенированием. Однако, для изначальной "регулировки" системы, мне нужно четко знать, с чем я имею дело. И просто определение ДНК микроорганизма в пробе, кстати, мало поможет, т.к. метод чувствителен вполне- нужна привязка к гемокультуре. Вот я и тестирую на местном микроорганизме, наделавшем делов в отделении- организм мне продали как редкую дрожжь. А ПЦР выпадает отрицательной. Вот я и пытаюсь разобраться , что мне подсунули. как в детской загадке- растет на Сабуро, но- медленно, продуцирует красно-розовый фермент, по форме бациллистый(размер померять сам не могу), и тд

[AlexT]

А как идентифицировали сначала на API этот микрорганизм?

[Anton Verbine]

Сообщение от AlexT

А как идентифицировали сначала на API этот микрорганизм?

По ID 32 C (био-Мерье, Франция) "наиболее близко" к Родоторула минута (там всего 3 вида родоторулы). К сожалению, что именно значит "наиболее близко"- микробиология молчит.
Меня же интересует один шаг до АПИ- как именно обычно решается, что дрожжи - это дрожжи, и какова чувствительность и специфичность этих тестов- бактерия- не бактерия? Т.к. , насколько я понимаю, если инокулировать бактерию в эту АПИ для дрожжей, то, вполне возможно, кто-нибудь из них тоже будет разлагать галактозу, сахарозу, лактозу етц.

[AlexT]

[Ссылки доступны только зарегистрированным пользователям ]
вот к примеру протокол исследования гемокультуры.

[Anton Verbine]

спасибо. мне бы что-нибудь подобное, только не про чувствительность, а- про специфичность.
Попробую поискать на молбиол.ру

[Tusia]

Сообщение от Anton Verbine

Вот я и тестирую на местном микроорганизме, наделавшем делов в отделении- организм мне продали как редкую дрожжь. А ПЦР выпадает отрицательной. Вот я и пытаюсь разобраться , что мне подсунули. как в детской загадке- растет на Сабуро, но- медленно, продуцирует красно-розовый фермент, по форме бациллистый(размер померять сам не могу), и тд

По ID 32 C (био-Мерье, Франция) "наиболее близко" к Родоторула минута (там всего 3 вида родоторулы). К сожалению, что именно значит "наиболее близко"- микробиология молчит.

С одной стороны - может, и правда, родоторула, только другая какая-нибудь (как раз и пигмент присутствует). С другой стороны (если ПЦР отрицательна), да еще "бациллистый", почему-то про серрацию подумалось. Вы не пробовали ее в API для энтеробактерий "засунуть"?
Вообще, кроме Сабуро, она еще на каких-нибудь средах растет?

насколько я понимаю, если инокулировать бактерию в эту АПИ для дрожжей, то, вполне возможно, кто-нибудь из них тоже будет разлагать галактозу, сахарозу, лактозу етц.

конечно

[Anton Verbine]

всё, отбой воздушной тревоги.
Я не в АПИ засунул, мы лучше сделали- с бактериальными праймерами k 16s прореплицировали, получили сигнал и отсеквенировали.
Что вы думаете? Конечно, не Родоторула. Более того, не дрожжь. А Метилобактерия, редкая медленно растушшая тварь. Гомология 98-99% с несколькими Генбанковскими штаммами (кстати, АПИ для Энтеробактерий, наверное, тоже как-нибудь ее идентифицировало бы, хотя Метиллобактерий там, думаю, нет.)
Завтра обрадую микробиологов. Думаю, они попробуют сказать, что контаминант- но я им не дам. По иронии судьбы, эта дрянь предпочитает Сабуро, растет медленно, и делает розовый пигмент, который становится коралловым при долгой инкубации- абсолютно точное описание нашего штамма. Плюс, отдельные неясности данного случая, включая не-чувствительность к Амфо- которую я видел своими глазами, а братская лаборатория замяла- прояснились.
Нобелевскую, конечно, за это не дадут, но гордиться есть чем. Для лаборатории она была бы родоторулой навечно, и больные бы продолжали получать амфо (удовольствие так себе)
Кстати, а что получается, если дрожжи покрасить по Граму?

[DmitryTro]

Грамм "-" - он и в Африке (Италии, дрожжей) Грамм "-"

[Tusia]

Сообщение от Anton Verbine

Нобелевскую, конечно, за это не дадут, но гордиться есть чем. Для лаборатории она была бы родоторулой навечно, и больные бы продолжали получать амфо (удовольствие так себе)

Поздравляю! Статью писать будете?

Кстати, а что получается, если дрожжи покрасить по Граму?

Примерно вот это [Ссылки доступны только зарегистрированным пользователям ] (обычно я такие вижу - клетки по сравнению с бактериями очень крупные), но лучше самим покрасить и посмотреть

[Anton Verbine]

Сообщение от Tusia

Примерно вот это [url]...

...все меня норовят обмануть, что за напасть... И Вы, по-моему, вместо окраски по Граму мне что-то другое подсовываете... Гимза?

А статью- да, наверное. Только сначала надо бы, конечно, разобраться с источником. Ух, чует мое сердце- это из диализата, "ультрачистого". И вместо работы по сепсису- получу я опять хронический диализный проэкт, несколько менее мне интересный...

[Anton Verbine]

izvinjajus'- okazyvaetsja drozhzhi G+


[Ссылки доступны только зарегистрированным пользователям ]