Уважаемые коллеги,подскажите.В новой серии Алкоровских наборов СА125 стрипы не с моноклональными АТ,а со стрепавидином,никаких изменений в методике нет,нормы теже,результаты высокие,контроль тоже
AlexPAR
26.12.2012, 09:00
До новой серии 3041 еще не дошел.
Стрептавидин позволяет увеличить чувствительность метода (моноклональные АТ есть) . В информационном листке сказано, что увеличен диапазон калибровки ( с 500 до 700). У меня только одно значение в этом диапазоне - 520, остальные либо ниже, либо более 1000. Инструкции старые, нормы, соответственно, тоже.
На сколько выросли значения контрольного материала?
Assandra
26.12.2012, 17:52
стрипы не с моноклональными АТ,а со стрепавидином,никаких изменений в методике нет,нормы теже,результаты высокие,контроль тоже
Коллега, Вы путаете специфические моноклональные антитела (реагирующие с СА125 сыворотки) с метками, предназначенными для визуализации реакции (пероксидаза в одних наборах, стрептавидин в других). Это незнание принципа ИФА. С этим надо что-то делать.
Assandra
27.12.2012, 11:55
При переходе на наборы с принципиально новой методикой (в данном случае - тест-системой) необходим период "перекрывания", когда пробы пациентов и контроли исследуются параллельно на обеих методиках. Количество серий (постановок) определяется загрузкой лаборатории и самой методикой.
И вот в этот период решаются все вопросы - работает ли методика, и если нет, то почему.
Olgazaitceva
27.12.2012, 20:41
Уважаемая Александра Сергеевна,по Вашему ответу я поняла то,что вы не сталкивались с проблемой о которой я спрашивала.Принципы ИФА принципами,но ни о какой смене методики и смене тест систем речи не идёт,в наборах кроме этикеток на упаковке со стрипами ни какой разницы нет,а там именно так и написано -с моноклональными АТ на одних и с со стреповидином на других,хотелось бы узнать у коллег мнение по поводу этих тест систем,может у вас есть информация по другим аналитам.
спасибо,Ольга
AlexPAR
28.12.2012, 08:38
[Ссылки могут видеть только зарегистрированные и активированные пользователи] :
"Особого внимания заслу- живает вариант, когда используется комплекс стрептавидин- биотин. Такая схема обладает рядом преимуществ, важных для определения онкомаркера СА 15-3. Данная схема реализо- вана в российском наборе ОнкоИФА-СА 15-3 производства Алкор Био (г. Санкт-Петербург). На планшет нанесены молекулы стрептавидина. На первой стадии анализа в лунки добавляются калибровочные пробы, контрольная сыворотка, исследуемые образцы и конъюгат моноклональных антител с биотином. Благодаря биодоступ ности и высокому сродству стрептавидина к биотину, проис- ходит специфичное связывание данных молекул и образуется комплекс стрептавидин-биотин-моноклональное антитело к СА 15-3. На второй стадии после промывки планшета добав- ляется конъюгированные с пероксидазой антитела, специфич- ные к определенному эпитопу СА 15-3. Меченное ферментом антитело связывается с молекулами СА 15-3, которые были иммобилизованы во время первой инкубации. По окончании инкубации проводится промывка планшета, инкубация с ТМБ, остановка реакции и учет результатов. Реализация данной схемы иммуноферментного анализа для определения онкомаркера СА 15-3, благодаря большой спо- собности биотиновых молекул связываться со стрептавидином, позволяет значительно расширить диапазон определяемых кон- центраций (в наборе Алкор Био он составляет 0-400 Ед/мл) и максимально удалить границы хук-эффекта высоких кон- центраций. Такие аналитические характеристики тест-системы дают возможность работать с большим количеством сыворо- ток с высокой концентрацией СА 15-3 без предварительного разведения,"
[Ссылки могут видеть только зарегистрированные и активированные пользователи] :
"В лунки, покрытые стрептавидином, вносятся калибровочные пробы с известным содержанием РЭА, контрольные и анализируемые образцы. Затем добавляется раствор, представляющий собой смесь конъюгатов двух моноклональных антител к РЭА с различной эпитопной специфичностью. Первое антитело конъюгировано с биотином, второе антитело – с ферментом. В результате реакции между моноклональными антителами и молекулой РЭА образуется комплекс, который связывается со стрептавидином, иммобилизованным на стенках лунок. После окончания инкубации антитела, которые не связались с молекулами РЭА, удаляются путем промывки. Во время инкубации с ТМБ происходит окрашивание раствора. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна концентрации РЭА в образце."
Из приведенных текстов не следует, что стрептавидин - некая метка, предназначенная для визуализации реакции
AlexT
28.12.2012, 09:51
Из приведенных текстов не следует, что стрептавидин - некая метка, предназначенная для визуализации реакции
Да. Система стрептавидин-биотин - это система усиления сигнала. Визуализацию обеспечивают метки - пероксидаза , например. Метить могут как стрептавидин, так и биотин или вобще не метить, метить антитела. Вариантов ИФА масса.
[Ссылки могут видеть только зарегистрированные и активированные пользователи]
[Ссылки могут видеть только зарегистрированные и активированные пользователи]
AlexPAR
28.12.2012, 10:48
Да я собственно, про это:
метками, предназначенными для визуализации реакции (пероксидаза в одних наборах, стрептавидин в других).
Т.е. стрептавидин приравнивают к метке, ферменту.
Вариантов ИФА масса, но тексты конкретно про наборы Алкор Био и про стрипы со стрепавидином, к которому (стрептавидину) никаких меток не прикреплено.
AlexPAR
29.12.2012, 06:30
Три пробы, сделаны в дубле, контрольный материал двух уровней (сливная сыворотка).
Думал, что воспроизводимость в новых наборах лучше. Получилось то, что получилось.
Инструкция, кстати, в месте описания принципа метода - новая.
Протоколы
AlexPAR
29.12.2012, 08:40
Assandra ([Ссылки могут видеть только зарегистрированные и активированные пользователи]), а почему бы Вам не извинится перед коллегой из Саратова. В своем первом посте Olgazaitceva ([Ссылки могут видеть только зарегистрированные и активированные пользователи]) сказала то, что написано на коробке, плюс проблему с завышением результатов. У меня эти коробки есть. Все так и написано. А Вы обвинили ее в некомпетентности...
AlexT
29.12.2012, 09:07
В принципе многие вопросы разрешились бы после постановки аттестованых контрольных сывороток. Проблема только найти сыворотку, аттестованную данным методом.
В этих условиях наиболее полезным был бы звонок производителю. У них есть возможность оценить насколько адекватно отработали станадарты набора.
AlexPAR
11.01.2013, 22:17
Еще 6 проб, сделанных обеими наборами.
Для части проб новый набор дал увеличение в 1,2-1,3 раза (как в прошлый раз). Для пробы 1 - почти в 3 раза, для пробы 6 - в 1,6 раза.
Контрольный материал тоже увеличен.
Не вижу какой-либо закономерности.
Протоколы: